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Cell Counting Kit-8(CCK-8) 细胞增殖与毒性检测试剂盒

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Cell Counting Kit-8(CCK-8)是由同仁化学研究所(Dojindo Laboratories)开发的检测细胞增殖/毒性的试剂盒,为MTT法的替代方法。试剂盒中采用同仁化学研究所开发的水溶性四唑盐(WST-8),在美国、欧洲等国家地区均持有专利,同仁化学研究所于2006年在中国获得了WST的注册商标。

CCK-8在国内知名科研院所、重点大学、三甲医院被广泛应用,国际认可度高,使用CCK-8发表的中外文献达600多篇,其中截止08年底SCI影响因子IF>10分的论文有37篇,最高IF38.5分。

2015年版中国药典第三部363页收载了新药:尼妥珠单抗(Nimotuzumab)注射液,是全球第一个以表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的单抗药物,也是中国第一个治疗恶性肿瘤的人源化单克隆抗体(商品名:泰欣生,生产商:百泰药业)。该药的生物学活性测定方法采用H292细胞(人肺癌淋巴结转移细胞)增殖抑制法(通则138页),使用了同仁化学研究所的CCK-8。这是CCK-8检测方法首次被中国药典收载,表明该方法已经获得国家权威机构认可。


《CCK-8法与MTT法相比的显著特点》

★ 灵敏度高,数据可靠,重现性好

★ 操作简便,省时省力

★ 水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞

★ 无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低

★ 为1瓶溶液,毋需预制,即开即用

★ 适合于高通量药物筛选


《CCK-8用途》

药物筛选、细胞增殖检测、细胞毒性检测、肿瘤药敏试验

《CCK-8与MTT、MTS法的灵敏度比较》

《CCK-8毒性》

CCK-8和其他检测方法对比可以得出CCK-8对细胞几乎无毒性,不伤害细胞,细胞可重复利用。

《原理图》  

Cell Counting Kit-8(CCK-8)利用了同仁化学研究所(Dojindo)开发的四唑盐----WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲?染料。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中;不需要预配各种成分。CCK-8法是用于测定细胞增殖或细胞毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。CCK-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲?染料能够溶解在组织培养基中,生成的甲?量与活细胞数量成正比。WST-8法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相当稳定,并且对细胞没有毒性,因此可以长时间孵育。

《CCK-8 检测步骤》

1:向各孔中加入100 μl细胞悬液a)。

2:在37℃下预孵育培养板b)。

3:向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10 μl。

4:37℃下孵育。

5:向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

6:37℃下孵育1-4小时e)。

7:测定450 nm处的OD值。


a) 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。

b) 建议使用CO2培养箱过夜预培养。

c) 使用培养基或PBS来制备溶液。

d) 如果待测溶液有还原性,测定不含细胞,但含有CCK-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。

 如果该吸光度很小,则可以直接加入CCK-8,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,

 并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的100 μl培养基和10 μl CCK-8进行检测。

e) 白细胞可能需要培养较长时间。


《活力计算》

细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100

A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度

A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

CK04-5ml
2020-08-24

详细信息

规格
500T
保存温度
冷藏(2-8C)